Normatividad aplicable

Manejo de animales de laboratorio

Principio de las “3 R’s” de la técnica humanitaria: Reemplazar, Reducir y Refinar, conceptos que se han vuelto clásicos en la literatura sobre animales en la experimentación.

Se entiende con el término reemplazar, sustituir a los animales con otros métodos, conocidos como alternativas, en especial cultivo de células, protozoarios, bacterias y modelos de computación. Reducir se refiere a disminuir el número de animales utilizados en una investigación, lo que se logra por medio de una minuciosa planeación y ejecución del experimento, utilizando animales homogéneos en cuanto a raza o cepa, edad, estado de salud, peso y procedencia. Con Refinar se entiende la disminución de la frecuencia o de la severidad de procedimientos inhumanos a los que los animales serán expuestos.

Bioterio

Personal:

·         Auxiliar de técnico de bioterio. Personal capacitado para realizar los procesos de atención diaria de los animales de laboratorio (alimentación, limpieza, inmovilización física) conocimiento de aspectos éticos y legales relacionados con el uso de los animales de laboratorio. Capacidad de identificar signos de enfermedad, conducta anormal, dolor y sufrimiento.

·         Técnico de bioterio. Personal capacitado para realizar además de los procesos del auxiliar técnico, los relacionados con el cuidado, producción y manejo experimental básico de los animales de laboratorio. Posee conocimientos de anatomía y fisiología de los animales de laboratorio, así como principios de anestesia. Efectúa actividades de esterilización de equipo y materiales, inmoviliza, toma muestras y administra sustancias y tratamientos bajo indicación del médico veterinario o del investigador.

·         Tecnólogo o supervisor técnico. Personal capacitado para realizar procesos de auxiliar y técnico; adémas de los procesos administrativos y de supervisión media relacionados con la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

·         El Médico Veterinario. Es el responsable del bioterio y supervisa que todas las actividades se lleven de manera correcta. Debe poseer destreza para desarrollar conceptos, habilidades para el manejo de personal y habilidad técnica, pensamiento crítico y capacidad para identificar y resolver problemas. 

Instalaciones:

Las instalaciones destinadas para el alojamiento de animales de laboratorio, serán diseñadas de acuerdo con las necesidades de los animales experimentales, y del personal que interviene en su cuidado diario. 

 

Ø  Cuarentena y acondicionamiento.

            Se debe contar con un sector específico e independiente para este propósito, el cual debe evitar el contacto con colonias ya establecidas y la posible transmisión de enfermedades. Debe permitir la separación física de especies y la realización de evaluaciones y tratamientos cuarentenario.

Ø  Cuarto para procedimientos diversos o de uso múltiple.

            Dependiendo del programa de trabajo del bioterio, éste debe contar con un cuarto de procedimientos diversos, para la manipulación experimental de animales, sus tratamientos, recolección de fluidos corporales o necropsias, identificación, preparación quirúrgica u otros.

Ø  Área de cirugía.

            Sector del bioterio destinado para y equipado de acuerdo con el desarrollo de procedimientos experimentales, analíticos o de enseñanza que requieran el empleo de técnicas quirúrgicas con supervivencia del animal en condiciones asépticas. 

Ø  Área de recuperación.

            Destinada y equipada de acuerdo con las necesidades de atención de sujetos sometidos a procedimientos invasivos, de conformidad con el criterio veterinario. 

Ø  Área de preparación de dietas.

            Debe existir una zona destinada y equipada de acuerdo con esta actividad. Su diseño debe permitir el mantener los insumos en un lugar independiente, fresco y libre de contaminación o fauna nociva indeseable.

Ø  Área de lavado.

            Debe ser localizada en forma independiente a las áreas de alojamiento animal, evitando que el ruido generado en ésta disturbe secciones de ocupación animal o humana. Contará con el equipo necesario para satisfacer los requerimientos de limpieza y desinfección del bioterio.

Ø  Depósito y eliminación de desechos del bioterio.

            Debe ser localizada de manera independiente a las áreas de alojamiento animal y equipada con refrigeradores y otros equipos, de acuerdo con la necesidad de mantener un manejo higiénico de la misma.

            Los desechos tales como cadáveres, órganos o sus partes, tejidos, líquidos corporales, materiales punzocortantes, jeringas y agujas hipodérmicas, entre otros, considerados residuos peligrosos biológicoinfecciosos, serán manejados y eliminados de acuerdo con la Norma NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, así como a la Ley General del Equilibrio Ecológico y la Protección al Ambiente. Los desechos de los bioterios que no son contaminantes o biológicos infecciosos, deben ser destinados al depósito general de basura.

Ø  Especificaciones de acabados sanitarios.

            Los bioterios deben ser provistos con acabados sanitarios que primariamente favorezcan la higiene como medio de prevención o diseminación de enfermedad, de acuerdo con el criterio veterinario.

Ø  Control del medio ambiente.

            El medio ambiente debe ser objeto de máxima atención para el animal de laboratorio, a fin de evitar que aun pequeñas variaciones de éste afecten negativamente la respuesta experimental.

Ø  Temperatura.

            Las instalaciones de animales de laboratorio ya sean para reproducción o experimentación, deben mantener una temperatura estable dentro de los cuartos, misma que oscilará de acuerdo al animal que se esté utilizando

Rangos de Temperatura y humedad relativa
Animal	Temperatura oC	% Humedad relativa
Ratón, rata, hámster, jerbo, cobayo	18-26	40-70

Ø   Ventilación.

            Las instalaciones para animales de laboratorio deben poseer un sistema de ventilación eficaz, que permita un recambio de aire ambiental que cubra un rango mínimo de 15 a 18 recambios de aire por hora.

El sistema debe funcionar ininterrumpidamente las 24 horas del día, a fin de favorecer una definición ambiental aceptable que no afecte negativamente la salud animal y la respuesta experimental.

Ø  Iluminación.

            Las instalaciones del bioterio estarán iluminadas mediante luz artificial tipo luz de día usando lámparas fluorescentes. La intensidad lumínica no debe exceder de 1,345 lúmenes para el desarrollo de tareas generales de limpieza, observación y registro dentro de los locales. 

Ø  Ruido.

            Las instalaciones dedicadas al alojamiento de animales de laboratorio deben contar con dispositivos de contención y control de ruido en equipos rodable. La intensidad de ruido no debe ser mayor a 85 dB. El control anterior debe ser alcanzado mediante buenas prácticas de cuidado animal y la orientación del personal de apoyo.

Obtención de animales:

            Los animales suministrados por los comerciantes o instituciones públicas con fines de investigación científica, desarrollo tecnológico e innovación, pruebas de laboratorio y enseñanza, deben acompañarse de información que describa el estatus microbiológico y genético de sus colonias o de animales individuales.

            Todos los traslados de animales incluyendo aquellos dentro de la misma institución deben ser planeados de manera en la que el traslado se minimice, pcon el fin de disminuir el riesgo de zoonosis y antropozoonosis; además, los animales deben ser protegidos contra condiciones climáticas extremas o sofocación debido al transporte en cajas cerradas, en cajuelas de automóviles o similares. 

Certificado de salud y calidad

            Todos los animales adquiridos por compra, donación o intercambio deben ir acompañados de documentos que establezcan las condiciones de salud y calidad en que se produjeron, criaron y mantuvieron hasta antes de su embarque o salida del lugar de origen.

Se debe llevar un control de animales mediante el siguieten formato: 

o   Nombre, dirección y razón social del proveedor.

o   Especie animal a la que se refiere el certificado.

o   Raza, cepa.

o   Cantidad total de animales.

o   Sexo, indicando la cantidad de cada uno.

o   Fecha de nacimiento, cuando se conozca.

o   Pruebas de laboratorio y/o gabinete, incluyendo fecha de la última realización para determinar el estado microbiológico cuando se requiera.

o   Nombre y firma del Médico Veterinario Zootecnista 

Salud animal.

o   Se debe implantar programas sanitarios para la prevención de enfermedades.

o   Mantener cajas y jaulas limpias, secas y en condiciones ambientales aceptables.

o   Se deben observar los animales para detectar cambios de comportamiento, enfermedades, heridas o muerte.

o   El agua suministrada a los animales debe ser potable y a libre acceso.

Identificación y registro.

            Todo bioterio debe contar con registros diversos para el adecuado control de sus poblaciones animales, ya sean colonias de producción o bien de animales bajo experimentación. 

Métodos aceptables para la identificación de animales: 

·         Tarjetas. Se colocan en las jaulas o cajas y los datos que en ella figuran corresponden a la identificación que llevan los animales que contienen.

·         Marcas naturales. Se consideran las características fenotípicas cuando sean fácilmente detectables y sin posible confusión. Deben estar perfectamente identificadas en las fichas, mediante dibujos o señales particulares.

·         Colorantes o tinturas.- Sólo se recomiendan en casos de identificaciones temporales, en un tiempo no mayor de 20 días y usar colorantes que no sean tóxicos para los animales.

·         Perforaciones y muescas.- Estas se aplican en las orejas de ratas, ratones y porcinos principalmente, de acuerdo a un código preestablecido.

·         Tatuaje.- Es aplicable en diversas partes del cuerpo del animal de acuerdo con la especie.

·         Transmisores subcutáneos. Los microchips que se insertan subcutáneamente en el cuello o espalda.

Alimento

Debe cumplir con las siguientes características:

a.    Debe estar libre de aditivos, drogas, hormonas, antibióticos, pesticidas y contaminantes.

b.    Debe estar dentro de su periodo de caducidad.

c.    Almacenado en bodegas o cuartos desinfectados, secos y ventilados, sobre tarimas o en contenedores

Roedores: Rata, ratón, cobayo, hámster y jerbo.

Confinamiento o encierro primario.

El equipo para alojar a los animales debe estar diseñado para facilitar el bienestar del animal, satisfacer las necesidades de la investigación y reducir o eliminar las variables experimentales.

Los roedores deben mantenerse en algunos de los tres tipos de jaulas o cajas existentes:

a.    Cajas con pisos y paredes continuas sólidas y con tapa removible de reja o perforadas, en los cobayos pueden ser sin tapa.

b.    Jaulas enteramente hechas de malla de alambre.

c.    Combinación de los dos tipos:

Confinamientos o encierros primarios: 

a)    Satisfacer las necesidades fisiológicas y conductuales de los animales, permitiendo los movimientos normales y ajustes posturales característicos de la especie.

b)   Cuando esté indicado, deberá favorecer la reproducción y la crianza.

c)    Permitir las interacciones sociales entre los individuos de la especie, el establecimiento de jerarquías y las conductas de escape.

d)   Brindar una ventilación e iluminación adecuadas.

e)    Favorecer que los animales se mantengan limpios y secos.

f)     Ser seguras, impidiendo el escape de los animales o el entrampamiento de sus extremidades.

g)   Deben tener bordes y aristas redondeadas.

h)   El diseño debe facilitar la limpieza y saneamiento rutinario y también las faenas de cambio, llenado y suministro de agua y alimento.

i)     Permitir la observación de los animales.

j)     Los materiales para la construcción de las jaulas deben ser resistentes, durables e impermeables.

k)    Deben mantenerse en buenas condiciones de uso

ESPACIO MINIMO PARA ROEDORES
Animal	Peso (g)	Área del piso (cm2)	Altura del piso al techo (cm)
Rata	<100	110	18
	100-300	187	20
	300-400	258	20
	400-500	387	20
	>500	452	20
Ratón	<10	39	12
	10-15	52	12
	15-25	78	12
	>25	97	12
Hamster	<60	65	18
	60-80	84	18
	80-100	103	18
	>100	123	18
Cobayo	<350	387	18
	>350	652	18
Jerbo	<60	65	15
	60-80	85	15
	80-100	105	15
	>100	125	15

Salud animal

            Los roedores deben estar libres de las enfermedades zoonóticas y parásitos externos, a menos que el procedimiento experimental indique lo contrario. En este caso, se debe contar con las medidas sanitarias y de control que asegure el control absoluto de los animales en experimentación, así como protección del personal en contacto con los animales, sus partes o sus desechos.

Manejo

1     Alimentación y provisión de agua.

Ø  El alimento debe proporcionarse a libre acceso o en forma restringida dependiendo de las necesidades de la cepa y de los procedimientos experimentales.

Ø  El alimento debe ser palatable, de una fórmula nutricional constante y certificado en cuanto a su composición. Se podrá proporcionar alimentos frescos a los animales.

Ø  El agua debe ser potable y suministrarse a libre acceso durante toda la vida del animal.

Ø  En caso de que el procedimiento experimental lo justifique se podrá hacer las modificaciones pertinentes a la dieta y forma de suministrar los alimentos.

COMPOSICION BROMATOLOGICA REQUERIDA
Animal	Proteína Cruda %	Grasa Cruda %	Fibra Cruda %	Cenizas %	Consumo diario alimento g	Consumo diario agua mL
Cobayo	17-25	4-11	12-16	7-9	25-30	12-15 mL/100g
Jerbo	15-24	4-11	4-6	6-8	10-15	3-4
Hámster	16-24	4-11	3-6	5-8	7-18	8-12
Rata	12-24	4-11	3-6	6-8	10-20	20-45
Ratón	17-24	4-11	3-6	5-7	3-6	3-7

2     Cama y nido.

            Los roedores alojados en cajas con piso sólido deben tener el material de cama suficiente que garantice la absorción de su orina, excremento y desperdicio de agua, favorecer su aislamiento térmico y construcción de nido.

            Los materiales de cama deben seleccionarse por su suavidad, capacidad de absorción, laxitud, ausencia de polvo y fragmentación, así como por la constancia de su calidad, neutralidad química, inercia nutricional y carencia de palatabilidad.

Técnicas experimentales

Analgesia y anestesia.

            Cualquier procedimiento que cause mayor dolor o molestia en los animales, que la producida por inyección o marcaje en orejas, requerirá el uso de tranquilizantes, analgésicos o anestésicos.

            La elección del fármaco a utilizar debe ser responsabilidad del investigador. Los signos que deben ser evaluados en la medida de lo posible en los animales anestesiados.

Evaluación de reflejos en animales bajo anestesia
Indicador	Respuesta
Patrón respiratorio	Número de respiraciones. Profundidad Características de la respiración
Color de mucosas	Correcta oxigenación: Mucosas rosadas (observar mucosas bucal, rectal u o vulvar)
Tiempo de llenado capilar (Se evalúa después de su liberación de una presión física que los mantuvo vacíos)	Un llenado capilar menor de dos segundos.
Pulso	Evaluar la fuerza y las características. Se valora la respuesta del animal a su actividad cardiovascular
Presión sanguínea	Puede ser monitoreada o por medio de detectores de flujo ultrasónico Doppler
Temperatura corporal	Entre más baje la temperatura disminuye  la capacidad para metabolizar las drogas
Ojos	Proporcionan una ventana del estado de anestesia.
Reflejos	Podal y el anal. Estos dos reflejos están presentes durante los planos quirúrgicos tres y cuatro, pero desaparecen cuando se alcanza la etapa cuatro de anestesia.

            No se permitirá la utilización de relajantes musculares o drogas paralizantes del tipo de la succinilcolina, guayacolato de glicerol o curariformes ya que no son anestésicos.

Consideraciones para la anestesia:

·         La dosificación seleccionada dependerá primero de los efectos, ya sea por sedación, analgesia o anestesia y después con base en la ruta de administración. La selección de la dosis dependerá de la especie, cepa o raza, edad, porcentaje de grasa en el cuerpo y condición del animal.

·         El animal debe de ser manejado siempre con cuidado pero con firmeza, procurando la seguridad del personal que lo manipula. Evitar lucha y estrés.

·         Previo a la anestesia los animales deben someterse a un periodo de ayuno suficiente para vaciar estómago, con el fin de prevenir la regurgitación o aspiración del contenido gástrico.

Preanestésicos.

            Se recomienda el uso, siempre que el procedimiento experimental lo permita de tranquilizantes, analgésicos y anticolinérgicos antes de suministrar el anestésico. Los preanestésicos, tranquilizantes y analgésicos ayudan a inducir la anestesia más suavemente. Los tranquilizantes reducen la aprensión del animal, lo cual facilita su inmovilización para la inyección intravenosa.

            Los narcóticos y tranquilizantes que se administran como preanestésicos también reducen la cantidad general de la dosis de anestesia que se requiere y por lo tanto incrementan el margen de seguridad.

Administración de fluidos y sustancias.

            La administración parenteral de fluidos y sustancias deberá  hacerse conforme a las prácticas clínicas y científicas generalmente aceptadas en el animal sujeto o inmóvil.

Vía de administración de fluidos y sustancias
Animal	Vena Auricular	Vena Caudal	Vena Cefalica	Vena Femoral	Vena Peneana	Vena Safena	Vena sublingual	Vena Yugular
Rata	-	+	-	-	+	+	+	+
Ratón	-	+	-	-	-	-	-	-
Jerbo	-	-	-	-	-	-	+	-
Hámster	-	-	-	-	-	-	-	+
Cuyo	-	-	-	+	+	+	+	+

-No Permitido                        +Permitido                                           *Previa anestesia o sedación

Obtención de sangre

Vías de obtención de sangre
Animal	*Vena Cava posterior	Vena femoral	*Corazón	Seno orbital	Vena auricular	*Vena Caudal
Rata	-	+	+	+	-	+
Ratón	-	-	+	+	-	+
Jerbo	-	-	+	+	-	-
Hamster	-	-	+	+	-	-
Cuyo	+	-	+	-	+	-

-No Permitido                                       +Permitido                             *Previa anestesia o sedación

Eutanasia

Criterios de elección para métodos de eutanasia.

            El método seleccionado para la eutanasia depende de varios factores, entre los que se destacan la naturaleza del estudio, la especie animal involucrada y su número. Dependiendo de la especie, el procedimiento debe ser individual. El procedimiento seleccionado debe cumplir invariablemente con lo siguiente:

·         Inducir la muerte sin producir signos de pánico o ansiedad en los sujetos.

·         Inducir la inconsciencia de los animales en un tiempo mínimo.

·         Ser un método confiable y reproducible.

·         Ser seguro para el personal involucrado en su uso.

·         Poseer compatibilidad con los requerimientos y el propósito del estudio.

·         Tener un impacto ambiental mínimo.

·         Ser a prueba de fallas.

·         Localizarse en un sitio apartado de los cuartos de animales.

Aplicación de la técnica.

·         Cuando el forcejeo durante la captura o la inmovilización cause dolor, lesiones o ansiedad en el animal o peligro para el operario, debe considerarse el uso de tranquilizantes, analgésicos y/o fármacos inmovilizantes.

·         Cuando se lleve a cabo la eutanasia no deben estar presentes otros animales, con excepción de grupos que mueran al mismo tiempo.

·         Después de aplicar la eutanasia, es imperativo verificar la muerte del animal confirmando la cesación de los signos vitales.

·         Cuando se emplean fármacos eutanásicos que causan la muerte por hipoxia directa o indirecta, la inconsciencia debe preceder a la pérdida de actividad motriz.

·         Cuando el método de eutanasia causa una interrupción física de la actividad cerebral por conmoción, destrucción directa del cerebro o despolarización eléctrica de las neuronas se induce inconsciencia, pero se debe causar la muerte del animal por destrucción del tallo cerebral

Métodos recomendables.

Ø  Agentes inhalables.

            La conveniencia de cada uno de estos agentes depende de la brevedad entre el momento en que se aplica y el momento en que se induce la inconsciencia. Se recomienda que el animal se exponga rápidamente a altas concentraciones del fármaco.

·         Los aparatos empleados para suministrar y mantener altas concentraciones de agentes que deben estar en buenas condiciones de operación.

·         Tomar en cuenta que los animales neonatos son más resistentes a la hipoxemia que los adultos de la misma especie

Ø  Anestésicos.

            Los anestésicos inhalables recomendados para la eutanasia de animales que pesan menos de 7 kg, o en aquellos en que la venipuntura es difícil son, en orden de preferencia: halotano, enflurano, isoflurano, metoxiflurano y éter.

El animal se coloca en un receptáculo cerrado que contenga un algodón o gasa empapada en el anestésico

Ø  Fármacos no inhalables.

            La administración intravenosa de fármacos que causan la muerte es el método más rápido y confiable de llevar a cabo la eutanasia.

Ø  Es el método más recomendable siempre y cuando no cause miedo o estrés al animal. Los animales asustados, deben sedarse antes de administrar el agente eutanásico.

Ø  Es aceptable la administración intraperitoneal cuando la vía intravenosa resulte impráctica o imposible, siempre y cuando el fármaco no sea irritante ni contenga bloqueadores neuromusculares Sólo se permite la inyección intracardiaca en animales bajo sedación profunda, anestesiados o comatosos.

Ø  No se permite la administración intramuscular, subcutánea, intratorácica, intrapulmonar, intrarenal, intraesplénica, intratecal o cualquier otra inyección no intravascular de los agentes eutanásicos.

Ø  Cuando el fármaco se administra por una vía diferente a la endovenosa, el animal debe colocarse en un lugar tranquilo que reduzca la excitación de las primeras etapas de la anestesia, y también la posibilidad de que se lesione.

Ø  Métodos físicos.

Los métodos físicos de eutanasia que se incluyen son: dislocación cervical, decapitación, perno cautivo penetrante y electrocución.

·         Dislocación cervical.

La dislocación cervical manual ejecutada apropiadamente induce inconsciencia rápidamente, se aplica porque no contamina los tejidos con substancias químicas..

Toma al animal por la base de la cola con una mano para su acomodo y se coloca sobre una superficie donde el animal se sostenga, con los dedos índice y pulgar de la otra mano o bien en su defecto un instrumento delgado pero rígido, se colocan sobre la base del cráneo y se ejerce tracción hacia atrás del animal a través de la base de la cola, para ocasionar la dislocación cervical.

·         Decapitación.

La decapitación es una técnica para la eutanasia de roedores que se realiza con un aparato especialmente diseñado para este propósito  llamado guillotina. Es un medio para obtener tejidos y fluidos corporales libre de contaminación química y/o tejido cerebral íntegro.

En base a las NOM:

NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Protección ambiental - Salud ambiental - Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones de manejo.